Определение парааминогиппуровой кислоты (ПАГ) по Смиту и сотр.

Принцип. Ароматическую аминогруппу диазотируют нитритом натрия, избыток нитрита удаляют сульфаминовой кислотой. Полученное после соединения с бромистоводородной солью этил-α-нафтиламина окрашивание измеряют с помощью ступенчатого фотометра.

Реактивы.

1. Кислый раствор сульфата кадмия (17,5 г) : кристаллической сернокислый кадмий растворяют в 84,6 мл нормального раствора H₂SO₄ и дополняют дистиллированной водой до 500 мл (этот раствор можно хранить в холодильнике около 2 месяцев).

2. 1 n/NaOH.

3. 1 n/НСl.

4. 0,1% раствор нитрита натрия (раствор можно хранить 3 дня).

5. 0,5% раствор сульфаминовой кислоты (в холодильнике сохраняется до 3 недель).

6. 0,1% раствор бромистоводородной соли этил-α-нафтиламина (0,1 г вещества растворить в 10 мл теплого метилового спирта и дополнить до 100 мл дистиллированной водой). Раствор в темной бутыли и в холодильнике может сохраняться неограниченный срок.

Техника определения в плазме

1. К 6 мл раствора сернокислого кадмия (1) добавить 20 мл дистиллированной воды и по каплям 2 мл плазмы, затем 2 мл 1 n NaOH (2), хорошо взболтать, дать 10 минут постоять и центрифугировать или фильтровать (разведение плазмы 1 : 15).

2. 10 мл центрифугата, 2 мл 1 n НСl (3) и 1 мл раствора сернокислого натрия (4) хорошо встряхнуть и оставить стоять 5 минут.

3. Добавить к 1 мл раствора сульфаминовой кислоты (5) 1 мл раствора бромистоводородной соли (6) и через 2 часа фотометрировать.

Толщина слоя 1 см. Фильтр S 53. Раствор для сравнения — контрольная плазма или соответственно контрольная моча.

Техника определения в моче

1. Развести мочу в отношении 1:500 (или выше соответственно концентрации).

2. Взять пипеткой 10 мл мочи и дальше поступать, как с фильтратом плазмы (см. выше пункт 2).

Расчет. Расчет концентрации ПАГ в миллиграммпроцентах производится с помощью составленной градуированной кривой. Высчитанную с помощью этой кривой концентрацию ПАГ в плазме надо помножить на фактор 0,83 (фактор 0,83 — связывание ПАГ белками плазмы). При расчете концентрации ПАГ надо учитывать разведение плазмы и мочи.

Составление градуированной кривой ПАГ.

Одну ампулу с 20% раствором ПАГ (10 мл) разводят в отношении 1 : 20 000 = 1 мг% раствора ПАГ.

Из этого 1 мг% раствора ПАГ приготовляют ряд все более слабых разведений вплоть до 0,05 мг% раствора ПАГ и далее поступают согласно приведенной ниже технике. Полученные величины переносят на логарифмическую систему координат.

Взятие крови. 1мл раствора щавелевокислого аммония (1,34% раствор в 0,85% растворе NaCl) и 9 мл венозной крови. Хорошо перемешать!